Метод пыльцевого анализа

10.3 Метод пыльцевого анализа

10.3.1 Аппаратура, материалы и реактивы
- микроскоп биологический с увеличением 1000х;
- камера Горяева для подсчета форменных элементов крови;
- центрифуга электрическая со скоростью оборотов до 5000 об/мин;
- весы лабораторные 2го класса точности с максимальной границей взвешивания 200 г согласно ГОСТа 24104;
- пробирки центрифужные согласно ГОСТа 25336;
- баня водная;
- термометр ртутный лабораторный до 100 оС согласно ГОСТа 25336;
- спирт этиловый ректифицированный с массовой долей 96% согласно ДСТУ 4221;
- фуксин основной кристаллический, спиртовой раствор с массовой долей 10%;
- ангидрит уксусный, х. ч., согласно ГОСТа 5815;
- кислота уксусная ледовая, х. ч., согласно ГОСТа 61;
- кислота серная концентрированная, плотностью 1,84 г/см3, х. ч., согласно ГОСТа 4204;
- вода дистиллированная согласно ГОСТа 6709.

10.3.2 Проведение испытаний

В химическом стакане взвешивают 20 г меда с точностью до 0,01 г, добавляют 40 см3 дистиллированной воды, помещают раствор на водяную баню при температуре 45 оС и нагревают до полного растворения меда. Далее раствор меда переливают в центрифужные пробирки и проворачивают в центрифуге при оборотах от 2500 об/мин до 3000 об/мин на протяжении 15 мин. С каждой пробирки сливают верхний слой, к осадку добавляют по 2 см3 дистиллированной воды, перемешивают и выливают все растворы в одну пробирку. Проворачивают в центрифуге по примеру, описанном выше. Раствор сливают, с осадка берут каплю, переносят на предметное стекло. Образец рассматривают под микроскопом при увеличении 1000х.

В цветочном меде с примесями пади находят водоросли. Наличие значительного количества дрожжевых клеток характерно для меда с признаками брожения (закисания).

10.3.2.1 Определение видового состава пыльцевых зерен

Осадок пыльцевых зерен готовят согласно п. п. 10.3.2. В пробирку с осадком каплями, что бы предотвратить разбрызгивание, доливают 3см3 смеси уксусового ангидрида и концентрированной серной кислоты (9:1). Содержание пробирки тщательно перемешивают и помещают ее на водяную баню при температуре 80 oС на 2 мин. Пробирку снова помещают в центрифугу на 15 мин при скорости от 2500 об/мин до 3000 об/мин. Осадок промывают ледовым уксусной кислотой, а потом 2-3 раза дистиллированной водой до исчезновения запаха уксусной кислоты. Жидкость сливают с осадка после каждого промывания и оборачивания в центрифуге на протяжении 15 минут.

Пробирку с осадком аккуратно переворачивают и помещают на фильтровальную бумагу для удаления воды. К осадку добавляют 0,1 см3 дистиллированной воды, размешивают, берут каплю и помещают ее в камеру Горяева для подсчета пыльцевых зерен и определения их видового состава.

Суспензию пыльцевых зерен помещают на обе сетки камеры, быстро накладывают стекло, что бы лишняя жидкость стекала в желобки. Под микроскопом насчитывают не больше 200 пыльцевых зерен, регистрируют их видовой состав. Количество пыльцевых зерен каждого вида расчитывают по формуле:

Х = 100*a/b,          (1)

где Х – количество пыльцевых зерен каждого вида, %;
а – подсчитанное количество пыльцевых зерен каждого вида, шт.;
b – общее количество подсчитанных пыльцевых зерен, шт.